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標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的試驗(yàn)步驟主要分為兩步

更新時(shí)間:2021-03-22瀏覽:1049次
  鑒別標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基:一類在成分中加有能與目的菌的無(wú)色代謝產(chǎn)物發(fā)生顯色反應(yīng)的指示劑,從而達(dá)到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養(yǎng)基。
  標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基的試驗(yàn)步驟
  1)制備細(xì)胞懸液
  A取長(zhǎng)成致密單層的細(xì)胞種子,將原細(xì)胞培養(yǎng)液從細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)吸出,用適量平衡鹽溶液洗細(xì)胞一次,棄洗液(去除死細(xì)胞)。
  B向細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入胰蛋白酶溶液1ml,消化一定時(shí)間,在顯微鏡下觀察,當(dāng)細(xì)胞變圓接近脫壁時(shí),將胰蛋白酶溶液倒掉。
  C根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入一定量細(xì)胞培養(yǎng)液,用吸管吹打,使細(xì)胞脫壁制成細(xì)胞懸液A。
  2)細(xì)胞培養(yǎng)
  A吸取一定量的細(xì)胞懸液A,加到細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
  B向細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加至10ml含體積分?jǐn)?shù)為3%或10%的小牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液,使細(xì)胞接種數(shù)量為5×104細(xì)胞/ml。
  C將細(xì)胞培養(yǎng)瓶送入培養(yǎng)箱,在(37±1)℃溫度條件及(5±0.1)%二氧化碳條件下進(jìn)行培養(yǎng)。
  D培養(yǎng)72h,觀察細(xì)胞形態(tài),按照2.7.1.4步驟1)方法制備細(xì)胞懸液,進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。
  E培養(yǎng)72h后,更換不含牛血清的細(xì)胞培養(yǎng)液10ml,繼續(xù)培養(yǎng)48h,觀察細(xì)胞形態(tài),按照2.7.1.4試驗(yàn)步驟1)方法制備細(xì)胞懸液,進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)。
  
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